[1]顾婧婧,金则新,李钧敏,等.乌药ISSR扩增条件的优化[J].西北林学院学报,2008,23(06):94.
　GU Jingjing,JIN Zexin,LI Junmin,et al.Optimization of the ISSR Conditions in Lindera aggregata[J].JOURNAL OF NORTHWEST FORESTRY UNIVERSITY,2008,23(06):94.
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乌药ISSR扩增条件的优化 ()
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《西北林学院学报》[ISSN:1001-7461/CN:61-1202/S]

卷:
第23卷
期数:
2008年06期
页码:
94
栏目:
出版日期:
2008-11-30

文章信息/Info

Title:
Optimization of the ISSR Conditions in Lindera aggregata
作者:
顾婧婧 1; 2 ;  金则新 2 ;  李钧敏 2 ;  李建辉 2 ;  毕泉鑫 2
1.西南大学 三峡库区生态环境教育部重点实验室，重庆 北碚 400715;2.台州学院 生 态研究所，浙江 临海 317000
Author(s):
GU Jingˉjing 1; 2 ;  JIN Zeˉxin 2 ;  LI Junˉmin 2 ;  LI Jianˉhui 2 ;  BI Quanˉxin 2
1.Key Laboratory of Ecoˉenvironments in Three Gorges Reservoir R egion’s （Ministry of Education）， Southwest University， Beibei， Chongqing 400715， China; 2. Institute of Ecology， Taizhou Univ ersity， Linhai， Zhejiang 317000， China
关键词:
乌药;  ISSR;  优化;  遗传多样性
Keywords:
Lindera aggregata ;  ISSR;  optimization;  genetic diversity
分类号:
Q948.1
文献标志码:
A
摘要:
为了确保ISSR分析的可靠性和重复性，有必要进行ISSRˉPCR反应体系的优化。 以浙江 省天台山乌药（ Lindera aggregata ）自然种群随机个体的基因组DNA为研究对象，通 过对反应体 系中的Mg 2+ 浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、Taq DNA聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行 筛选和优化，得出了适用于乌药ISSR分析的扩增条件:10μL PCR反应体积，1×Taq酶配 套缓冲 液（200 mmol·L -1 Tris·HCl，pH 8.8，100 mmol·L -1 KCl，1%Triton Xˉ100，100 mmol·L -1 （NH 4 ） 2 SO 4 ，20 mmol·L -1 MgCl 2 ），0.5U Taq DNA聚合酶，10 ng模板DNA，10 pmol引物，0.4 mmol·L -1 dNTP。利用优化反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物 对20个乌药个体的DNA进行扩增，共得到142个位点，其中，102个为多态位点，多态位点 百分率为 71.83%，Nei指数为0.284 3，Shannon信息指数为0.415 3，乌药的遗传多样性处于较高 水平。
Abstract:
It is necessary to optimize the ISSRˉPCR reaction system t o make sure of getting the reliable and repeatable results in the PCR amplification. The ISSR reaction sys tem of Lindera aggregata obtained from DNA group of random individual of Lindera aggregata community in Ti antai mountain of Zhejiang provˉ ince was optimized， and the effect of Mg 2+ concentration， dNTP concentration， DNA templates dosage， Taq DNA polymerase dosage， BSA concentration and primer dosage on I SSR amplification were tested. The optimal reaction system of ISSR was determined as follows: 1× Taq polymerase corresponding buffer （200 mmol·L -1 Tris·HCl， pH 8.8， 100 mmol·L -1 KCl， 1% Triton Xˉ100， 100 mmol·L -1 （NH 4 ） 2 SO 4 ， 20 mmol·L -1 MgCl 2 ）， 0.5U Taq DNA polymerase， 10 ng template DNA， 10 pmol primer， 0.4 mmol·L -1 dNTP in total 10 μL reaction volume. 12 reliable and repeatable pri mers were selected from 100 primers using the optimal ISSR reaction system. 142 bands w ere amplified in 20 individuals， aˉ mong which 102 were polymorphic loci， the percentage of which was 71. 83%. Nei's （1973） index 0.284 3 and Shannon's Information index was 0.415 3， indicating the relativel y higher genetic diversity within popˉ ulation of L. aggregate .

参考文献/References:

［1］ ZIETKIEWICZ E， RAFALSKI A， LABUDA D. Genome finˉ ger printing by simple sequence repeat （SSR）ˉanchored polyˉ merase chain reaction amplification ［J］. Genomics，1994，20: 176ˉ183.
［2］ 姜静，杨传平，刘桂丰，等. 桦树ISSRˉPCR反应体系的优化 ［J］.生态学杂志， 2003， 22 （3）: 91ˉ93.
［3］ 葛永奇，邱英雄，丁炳扬，等.孑遗植物银杏群体遗传多样性的 ISSR分析［J］.生物多样性，2003， 11（4）: 276ˉ287.
［4］ LI A G.Genetic variation and colonal diversity of psammochloa villosa （Poaceae） detected by ISSR markers［J］. Ann Bot， 2001，87: 585ˉ590.
［5］ 王峥涛，徐珞珊，徐国钧，等.乌药的化学成分及药理作用［J］. 中国野生植物资源，1999， 18（3）: 5ˉ10.
［6］ 王军伟，阮冰.乌药的植化及药理研究概况［J］.浙江中医杂志， 2006，41（11）: 675ˉ677.
［7］ 张朝凤，孙启时，赵燕燕，等.乌药叶中黄酮类成分研究［J］.中 国药物化学杂志，2001，11（5）: 274ˉ276.
［8］ 张朝凤，孙启时，王峥涛，等.乌药茎中鞣质类成分及其抗 HIV21整合酶活性研究［J］.中国药学杂志，2003，38（12）: 911ˉ914.
［9］ 周继斌，翁水旺，范明，等. 乌药块根及根、茎挥发油成分测定 ［J］.中国野生植物资源， 1999，19（3）: 45ˉ47.
［10］ 陈丽华，姜景民，栾启福，等.乌药种源苗期性状变异研究［J］. 江西农业大学学报，2005，27（5）: 748ˉ752.
［11］ 李均敏，金则新，柯世省.濒危植物七子花RAPD条件的优化 ［J］ .植物学通报， 2002，19（4）: 452ˉ456.
［12］ KREADER C A. Relief of amplification inhibition in PCR with bovine serum albumin or T4 gene 32 protein［J］. Appl Environ Microbio，1996，62 （3） :1102ˉ1106.
［13］ 卢盛栋.现代分子生物学实验技术［M］.第2版.北京:中国协 和医科大学出版社， 1999: 458ˉ463.
［14］ 袁长春，施苏华，叶创兴.扩增条件对茶类植物RAPD带的影 响［J］.热带亚热带植物学报，1999，7 （4）: 313ˉ317.
［15］ 蔡琰琳，金则新，李钧敏.大血藤ISSRˉPCR反应体系的建立 ［J］.江西农业大学学报，2006，28（4）: 583ˉ586.
［16］ 张君毅， 郭巧生， 杭悦宇.半夏ISSRˉPCR反应体系的建立及 条件优化研究［J］.江苏农业科学，2007（2）: 154ˉ157.

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　TAN Tan,JIN Zexin,LI Junmin,et al.Genetic Differentiation of Calycanthus chinensis an Endangered Plant[J].JOURNAL OF NORTHWEST FORESTRY UNIVERSITY,2008,23(06):77.
[3]金则新,李钧敏.濒危植物长叶榧ISSR－PCR反应体系的建立[J].西北林学院学报,2006,21(05):94.
[4]王小伟,金则新,柯世省,等.乌药光合特性日进程与其环境因子的相关分析[J].西北林学院学报,2010,25(02):5.

备注/Memo

备注/Memo:
⒇ 收稿日期:2007ˉ10ˉ02 修回日期:2007ˉ11ˉ20 基金项目:浙江省自然科学基金资助（ Y505331） 作者简介:顾婧婧，女，硕士研究生，从事植物生态学研究。ˇ通讯作者:金则新 ，男，教授，从事植物生态学研究。Eˉmail:jzx@tzc.edu.cn。
更新日期/Last Update: